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介紹徠卡熒光顯微鏡的燈泡調中和熒光觀察

更新時間:2023-09-04      點擊次數:967
     徠卡熒光顯微鏡是由生物顯微鏡和落射熒光裝置組成,廣泛應用于生物學、醫學、免疫學、腫瘤學、遺傳學、材料科學等領域。配有消雜散光系統,將強烈的雜光導入至物鏡光路之外,并加以吸收,大大提高了徠卡熒光顯微鏡的圖像信噪比。
    一、燈泡調中:
    (1)任選一塊標本放在載物臺上;
    (2)轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路,轉動濾色片組轉換手輪,將紫光(V)或藍光(B)或綠光(G)激發濾色片組轉入光路,并將10X熒光物鏡轉入光路;
    (3)調節粗微調手輪,將標本像調焦清晰;
    (4)前后推動垂直照明器右邊的聚光鏡調焦推桿,使視場光欄成像清晰,轉動視場光欄撥桿將視場光欄收小,調節視場光欄調中螺釘使視場光欄居中,然后再將視場光欄開至較大;
    (5)轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路,前后調節燈箱上的聚光鏡撥桿,使汞燈的弧光在視場內成像清晰;
    (6)調整燈箱上的燈泡水平調節螺釘和垂直調節螺釘,使汞燈的弧光居中;
    (7)調整反光鏡水平調節螺釘和垂直調節螺釘,使光源的反射像與汞燈的弧光分開;
    (8)轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路,此時視場照明均勻。

 

 
    二、熒光觀察:
    (1)將熒光染色標本放到載物臺上。
    (2)將10X平場物鏡或40X熒光物鏡轉入光路,調節載物臺縱橫移動手輪,將標本移入光路。
    (3)轉動濾光片轉換撥輪,將熒光染色標本所需要的激發濾光片組轉入光路。激發濾光片組編號刻在濾片組轉換撥輪上。濾光片選擇正確與否,是徠卡熒光顯微鏡能否得到正確應用的關鍵。選用濾光片時,必須遵守斯托克斯定律:激發濾光片的透射波長<雙色束分離器的透射波長<阻斷濾光片的透射波長。由于激發濾光片、雙色束分離器和阻斷濾光片,出廠時已按其用途和本身的光學特性進行了嚴格的組合匹配,在觀察和攝影時,只需選擇濾光片組即可。
    (4)調節粗調手輪,當看清熒光圖像輪廓后,再用微調手輪調焦,直至看到清晰的熒光圖像。
    (5)當需要得到較強的熒光圖像時,可轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移入光路,可獲得較明亮的熒光圖像。
    (6)當需要使用40X或100X熒光物鏡觀察時,應在標本和物鏡間加上甘油,油中不能有影響觀察的小泡或雜質。使用時可使甘油慢慢浸潤一會兒,然后輕輕左右來回轉動物鏡轉換器以排除氣泡。
     徠卡熒光顯微鏡對于物質的檢出能力是非常高的,具有放大的作用;而且對于被檢測物質的細胞的刺激也是非常小的,可以檢測活體的染色體;還有就是可以進行多個步驟的染色。對于熒光素的構造觀察是非常好的,一般的顯微鏡是看不出來的。而且對于一些物質是否有熒光,熒光是什么色調的進行判斷,還能看出是不是抗體的熒光。此款顯微鏡對于物體的定性、定量分析都是可以測定的。
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